Қоректік ортаға себу әдістері мен тәсілдері. Инкубациялық. Биология, 11 сынып, дидактикалық материал.

Микроорганизмдерді себу техникасы

Бактериологиялық әдіс-микробтардың таза дақылдарын бөлу және оларды кейіннен сәйкестендіру-қоршаған орта объектілерінің (су, ауа, топырақ, азық-түлік) санитарлық-гигиеналық жағдайын зерттеу кезінде жұқпалы ауруларды диагностикалауда үлкен маңызға ие. Дегенмен, бұл әдіс бойынша бірінші қадам бактериялық дақылдарды қоректік ортаның түрлі түрлерінде себу немесе қайта себу болып табылады. Себуге арналған материал бактериялардың отырғызылған дақылдары, жануарлар мен адамның әртүрлі экскременттері, мәйіттің ұлпалары, су, топырақ, тамақ болуы мүмкін. Себуге арналған сұйық материал ілмектер немесе тамшуырдың көмегімен алынады. Ілмекті алу кезінде сұйықтық жұқа мөлдір пленка - ілмектің сақинасында "айна" құрауы тиіс. Пипеткалар материал үлкен немесе дәл өлшенген көлемде себілген кезде пайдаланылады. Тығыз материалды алу тәсілі оның консистенциясымен анықталады. Жиі егу кезінде бактериялық ілгек қолданылады. Микробтық дақылдарды егумен және бөлумен байланысты барлық манипуляциялар жанарғы жалынының үстінде орындалады. Бактериялық ілгек материалды алу алдында жалын үстінде қызады, содан кейін ілгек салқындатылады. Ол үшін микробты дақылдарды қайта еггенде пробиркадан конденсациялық сұйықтыққа ыстық ілмекті салады, ал Петри тостағандарынан қайта еггенде олар микробтардың өсуінен бос қоректік ортаның бетіне тиеді. Жеткілікті салқындатылған контур сұйық конденсаттың конденсациясын тудырмайды және ортамен түйіскен кезде агарды балқытпайды. Себуді аяқтағаннан кейін петлюді микроағзалармен жұқтырған микробтық дақылдарды немесе материалды жою үшін қайтадан өртейді. Егу үшін пайдаланылатын тамшуырлар мен шпательдерді дезинфекциялық ерітіндіге салады. Төменгі жағынан Петри тостағандарына инокуляциядан кейін, жоғарғы үштен біріндегі пробиркаларда себілген материалдың атауын жазыңыз, талдау нөмірін және инокуляция күнін қойыңыз.

Қатты және сұйық қоректік ортаға себу техникасы:

1. Егу кезінде сұйық қоректік ортада ілмек материалмен оған батырылады сәрсенбі күні. Егер материал тұтқыр болып табылса және ілмектен шығарылуы мүмкін болмаса, оны ыдыстың қабырғасына сүртеді, содан кейін сұйық ортамен жуады. Пастер немесе градуирленген тамшуырға жиналған сұйық материалды қоректік ортаға құяды.

Сур. 11. Микробтарды пробиркадан пробиркаға ауыстыру схемасы.

2. Сиыр сығындысы бар шабылған агарда инокуляция кезінде пробирканың негізі қолдың бетінде болатындай етіп, ал егу көздің бақылауымен жүргізіледі. Түтіктен жасалған тығын түтікке кіретін түтіктің бөлігіне тимей, оң қолмен екі саусақпен жойылады. Оң қолдың қалған 3 саусағы егу жүргізілетін бактериялық ілмекті өту үшін бос қалады. Ілгек қалам ретінде сақталады. Тығынды алып тастағаннан кейін қоректік ортасы бар пробирканы бөгде микроорганизмдердің түсуінің алдын алу үшін көлбеу күйінде ұстайды. Тасымалдауға арналған материалы бар ілмектер пробиркаға түбіне дейін орналастырылады, қоректік ортаның бетіне тегіс түсіріледі және қозғалыстармен қозғалады, пробирканың бір қабырғасынан екіншісіне төменнен жоғары, соққы жасайды (сурет.).

3. Тығыз қоректік орта бетіне себілген кезде Петри тостағанына сол қолмен ұстайды. Бір жағынан оның түбі 1 және II саусақпен, ал екінші жағынан IV және V саусақпен ұсталады. Қақпақ, ілмекті немесе шпатель пайда болған саңылауға еркін өтуі мүмкін, 1 және III немесе 1 және II саусақпен бекітіледі (сурет.). Тестіленетін материалдың аз мөлшері бактериялық ілмектің көмегімен ыдыстың шетінде қоректік ортаның бетіне сүртіледі. Содан кейін ілмекті, онда бар артық материалды жою үшін жағады. Егіс желісі материал орналасқан жерден басталады. Бактериялық ілгек оның бетін сызып кетпеу үшін қоректік ортаға тура салынған және кесе түбін (орта мөлдір болған жағдайда) бірнеше тең бөлікке алдын ала бөліп, бүкіл ортада немесе секторлар бойынша жағындылар жасалады. Ілмектер жағылатын соққылар бір-біріне мүмкіндігінше жақын орналасуы керек, өйткені бұл себудің жалпы сызығын ұзартады және себілген тұқымды тығыз қоректік ортаның бетіне біркелкі таратуға мүмкіндік береді. Сіз орнына ілмектер тампон немесе шпатель пайдалануға болады.

Сур. 12. Петри тостағандарында қатты қоректік ортаға себу.

Тұқым материалында микробтардың молдығы кезінде олар қоректік ортаның бүкіл бетін жабатын пленка түрінде өседі. Микробтардың өсуінің бұл табиғаты үздіксіз немесе көгалды деп аталады. Көгалды егу бір түрдің микробтық мәдениетінің көп санын алу қажет болған кезде жүргізіледі.

4.Тығыз қоректік ортаның қалыңдығына себілетін материалдан суспензияны стерильді су құбырында немесе изотоникалық ерітіндіде дайындайды. 0,1-1 мл суспензияларды пипеткаға жинайды (микробтық ластану дәрежесіне байланысты) және Петридің бос стерильді тостағанына құяды. Осыдан кейін тостағанға 15-20 мл сиыр агарын құйып, балқытады және 40 - 45 ° C температураға дейін салқындатады (осы температурада щекке жанасқан кезде ортасы бар пробирка күйдіру сезімін тудырмауы тиіс). Зерттелетін материалды қоректік ортада біркелкі тарату үшін ішіндегісі бар жабық кесе үстелдің бетіне сәл бұрылады.

5. Инъекциямен қоректік ортасы бар колонкаға себуді колонка түрінде мұздатылған ортасы бар пробиркада жүргізеді. Құбыр әдетте сол қолмен алынады және бағананың ортасында Құбыр түбіне дейін материалмен ілгек енгізіледі.

ТАЗА ДАҚЫЛДАРДЫ АЛУ. Таза микробтық дақыл оқшауланған микробтық колониядан алынған сол түрдегі микроорганизмдер популяциясына жатады. Микробтық колония-бір микробтық жасушаның көбеюі нәтижесінде пайда болатын бактериялардың ұрпағы. Микробтардың таза мәдениетін бөлу кез келген бактериологиялық зерттеудің міндетті кезеңі болып табылады. Таза дақыл морфологиялық, культуралдық, биохимиялық және антигендік қасиеттерді зерттеу үшін қажет,олардың жиынтығы зерттелетін микроорганизмнің түрлік тиістілігін анықтайды.

Құрамында мол аралас микрофлорасы бар материалдардан таза микробтық дақылдарды бөлудің көптеген әртүрлі тәсілдері ұсынылды. Зерттелетін материалда тұрған микроағзаларды механикалық бөлу әдісі кеңінен қолданылады. Элективтік қоректік орта таза дақылы бөлінуі тиіс микроорганизмдердің дамуын ынталандыру үшін кеңінен қолданылады. Микробтардың кейбір түрлері қоршаған ортаның белгілі бір факторларының әсеріне өте сезімтал. Микробтардың қандай да бір факторға жеке тұрақтылығы ілеспелі микрофлораны жою арқылы таза дақылдарды бөлу әдістерін әзірлеу үшін қолданылды. Бұл әдіс жоғары температураға төзімді микробтардың даулы түрлерін, қақырықтағы басқа микробактерияларды қоспағанда, минералдық қышқылдардың концентрацияланған ерітінділеріне ұқсамайтын туберкулез микробактерияларын бөліп шығарады. Патогенді микробтардың таза дақылдарын бөгде микрофлорамен ластанған патологиялық материалдан бөлгенде, олар кейде зерттелетін материалдан оқшауланатын микробтардың түріне сезімтал зертханалық жануарларды жұқтыруға тырысады. Таза дақылдарды бөлудің биологиялық әдісі қақырықты пневмококтардың, туберкулез микобактерияларының болуына зерттеу кезінде қолданылады. Таза дақылдар түрінде бактерияларды бөлу үшін салыстырмалы түрде аз әдістер белгілі. Көбінесе бұл егіс бөренесі әдісімен қатты қоректік ортада жеке жасушаларды бөлу арқылы жасалады.

Сол колониялар әдетте таза дақылдардан өседі және микроскопиялық зерттеу кезінде ұқсас жасушалар, атап айтқанда, көлемі мен түсі грамм бойынша анықталады. Алайда, мысалы, таза дақылдардан өсетін колониялар тегіс (S) және өрескел (R) болуы мүмкін. Сонымен қатар, әр түрлі микроорганизмдердің таза дақылдарында кокковидті жасушалар, кисталар мен даулар пайда болуы мүмкін. Ақырында, кейбір микроорганизмдер граммның өзгергіштігін көрсетеді. Жағындылармен себу. Қатты ортасы бар шыныаяқтарға ("штрихталған шыныаяқтар") штрихтармен себудің көптеген жолдары бар, бірақ олардың тек азы ғана экспериментатор біліктілігі болмаса да, жақсы оқшауланған колониялар береді. Сонымен қатар, аралас дақылдардың сұйылтылған ерітінділерін шыныаяқтарға қатты ортаның бетіне төгуге болады. Анаэробтармен жұмыс істеу кезінде" штрихталған " шыныаяқтар немесе әуе атмосферасында бүрікілетін сұйық дақыл бар шыныаяқтар, содан кейін анаэростатта инкубацияланады. Анаэробтар үшін жаңа дайындалған орта қажет, ал жолақтарды ерітілген оттегінің жиналуын болдырмау үшін автоклавтаудан кейін алғашқы 4 сағат ішінде жасау керек.

Сур. 13. Жеке колонияларды алу үшін ыдыстарда штриховканың ыңғайлы әдісі.

A. Петри тостағанының артқы жағында қарындашпен таңбалау үшін түпті 3 секторға бөлетін Т әрпі қолданылады.

Б. зигзаг тәрізді мәдениет ілгектері көрсетілгендей, 1-секторда агардың бетіне штрихтар жағады. Ол үшін алдымен шыныаяқ қақпағын көтеріңіз, ал соққыдан кейін бірден жабыңыз. Ілмекті жалынға стерильдейді және (15 с) суытады.

C. суреттегі 1-сектордағы орта бетіне ілгекті салыңыз және 2-сектордағы орта бетіне зигзаг тәрізді жағындыларды бірден жағыңыз. Ілмекті жалынға жылытады және суытады.

D.Петля 2-сектордағы орта бетінде көрсетілгеніндей сызылады және содан кейін зигзаг тәрізді белгілер 3-сектордағы орта бетіне жазылады.

E. жоғары төңкерілген табақшалар қақпақтан конденсирленген су агардың бетіне түспеуі үшін суретте көрсетілгендей инкубацияланады. Колониялардың көп саны 1-секторда өсуде, ал жеке Жақсы оқшауланған колониялар 2 және 3-секторларда пайда болады.

Қоршаған ортаға сіңіру арқылы таза мәдениетке қол жеткізу (Кохтың айтуы бойынша)

Сиыр етінен экстрагирленген 15 мл агардан тұратын үш пробирканы агарды балқытуға арналған су моншасына салады. Тестіленетін материалдың бір бактериялық ілмегі пробиркаға салынады. Материалды ортамен араластыру үшін іріктелген пробирканы қолдың алақандары арасында қысып бірнеше рет айналдырады. Осыдан кейін тұтанған және салқындатылған 1-ші түтікшенің контурының ішіндегісі 2-ші түтікшеге және сол жолмен 2-ден 3-ші түтікшеге беріледі. Дайындалған микробтық сұйылтқыштар пробиркалардан нөмірленген, пробиркалардың тиісті нөмірлерімен белгіленген стерильді Петри тостағандарына құйылады. Сәрсенбі ұйыған соң, шыныаяқтарды термостатқа салады. Қоректік ортасы бар тостағандағы колониялар саны материалды араластыру кезінде азаяды.

Дригальский әдісімен таза мәдениетті оқшаулау. Балқытылған өсу ортасы үш петриге арналған ыдысқа құйылады. Мұздатылған орта міндетті түрде кептіріледі, өйткені оның ылғалды беті біріктірудің өсуіне ықпал етеді. Сынақ материалының бір тамшысы бірінші шыныаяққа енгізіліп, стерильді шпательмен культура ортасының бетіне жағылады. Әрі қарай, шпательді күйдірмей және жаңа материал жинамай, шпатель екінші және үшінші шыныаяқтарға өтіп, қалған материалды қоректік ортаның бетіне ысқылайды. Дригальский ұсынған бетті сүзу әдісі таза микробтық мәдениетті алудың ең кең таралған әдісі болып табылады. Шпательдің орнына сіз цикл қолдана аласыз.Қоректік ортадағы материал шыныаяқ бойында бір бағытта параллель соққылармен таратылады. Содан кейін, шыныаяқты 180 ° бұрап, алғашқы соққыларға перпендикуляр бағытта соққыларды тартыңыз. Бұл егу әдісімен циклдағы материал біртіндеп жұмсалады, ал егілген соң торлы сызықтар бойымен оқшауланған микробты колониялар өседі.